白介素27和芳香烃受体在Vogt-小柳原田综合征和Behcet病发病机制中作用的研究

【摘要】背景葡萄膜炎通常是指发生于葡萄膜、视网膜及视网膜血管的炎症疾病。多为葡萄膜炎多发生于青壮年，往往反复发作，治疗棘手，并且由于导致视网膜和视神经的损害，其所致盲为不可逆和永久性盲目。VKH综合征是一种以葡萄膜炎、脑膜刺激征、白癜风和听力损害为特征的自身免疫性疾病。Behcet病是一种以葡萄膜炎、复发性口腔溃疡和生殖器溃疡、多形性皮肤病变、常伴发自行消退和恶化为特征的多系统、多器官受累的炎症性疾病。Behcet病、VKH综合征是我国致盲率最高和最常见的葡萄膜炎类型，两者的病因目前还不清楚，但自身免疫反应失调参与了两种疾病的发生，据报道这两种疾病中都存在Th17和Treg细胞功能和数量的异常。白介素27（IL-27）主要由抗原提呈细胞分泌产生，在自身免疫动物模型中发现IL-27可以通过抑制Th17极化和促进调节性T细胞的诱导从而抑制炎症的发生和发展。但是，IL-27在人类自身免疫性疾病中的作用还不是很清楚。最近研究报道发现芳香烃受体（AhR）可以参与自身免疫性疾病的发生和发展。AhR的配体ITE可以抑制EAE的炎症严重程度，AhR基因缺陷的巨噬细胞分泌更多的炎性细胞因子。但AhR在人类自身免疫性疾病的确切作用尚不清楚。基于上述研究背景，本课题主要进行以下两方面的实验：1.探讨IL-27和AhR在VKH综合征或Behcet病患者的表达水平，以期确定其是否参与这两种疾病的发生和发展。2.进一步探讨IL-27和AhR在这两种疾病发生中的作用及机制。通过上述研究，以期阐明这两种疾病的发生机制，为其防治提供新策略和新靶点。第一部分IL-27在Vogt-小柳原田综合征发病机制作用中的研究目的：尽管VKH综合征被认为是一种自身免疫性疾病，但是其确切的发病机制尚不清楚。在动物模型的研究中发现IL-27是促炎T细胞免疫反应的抑制者。在此，我们主要探讨IL-27在Vogt-小柳原田综合征发病中所起的作用。方法：分别抽取VKH综合征的活动期和静止期患者，正常对照组的外周静脉血，分离外周血单个核细胞，使用荧光定量PCR技术检测IL-27P28和EBI3的mRNA表达水平；使用ELISA方法检测血清，PBMCs，naiveCD4+T细胞和DC-T细胞共培养上清中的细胞因子水平。利用流式技术检测IL-17阳性T细胞的比例。结果：（1）活动期VKH患者PBMCs中IL-27p28mRNA（IL-27独有的亚单位）水平显著低于VKH静止期患者和正常对照组，而三组中EBI3mRNA的表达水平无统计学差异。活动期VKH患者中IL-27血清水平显著低于静止期患者和正常对照组，而静止期患者和正常对照组之间没有统计学差异。活动期Vogt-小柳原田综合征患者PBMCs无论是否有SAC刺激，其培养上清中IL-27水平显著低于静止期患者和正常对照组，而静止期VKH综合征患者和正常对照组的PBMC是否SAC刺激，其培养上清中IL-27水平无统计学差异。（2）活动期VKH综合征患者PBMCs中产生IL-17阳性的CD4+T细比例显著高于静止期VKH患者和正常对照组，而在静止期VKH患者和正常对照组之间分泌IL-17阳性的CD4+T细胞比例无统计学差异。（3）重组IL-27显著抑制VKH患者和正常对照组中naveCD4+T细胞向Th17细胞分化和IL-17分泌.IL-27处理的DC可以显著抑naveCD4+T细胞向Th17细胞分化。（4）IL-27显著促进naveCD4+T细胞分泌IL-10，而且活动期VKH综合征患者的naiveCD4+T细胞在IL-27的刺激下分泌IL-10的水平显著低于静止期患者和正常对照组。（5）VKH患者经过药物治疗后，血清中IL-27水平显著升高，PBMCs分泌IL-27水平也显著上调，体外实验发现糖皮质激素可以显著促进PBMCs分泌IL-27，而环孢素对IL-27分泌没有影响。结论：我们的结果显示：活动期VKH患者中IL-27表达降低可能导致Th17细胞的高表达，进而参与了疾病的发生和发展。调节IL-27将可能为治疗此类疾病提供一个新策略。第二部分芳香烃受体在Behcet病发病机制中作用的研究目的：最新研究发现芳香烃受体（AhR）在免疫和炎症反应中起着重要作用。AhR通过与其配体（例如非毒性的FICZ和ITE）发挥作用。Behcet病是一个自身炎症性疾病，在本项目研究中，我们探讨AhR在Behcet病发病机制中的作用及其机制。方法：分别抽取活动期Behcet病患者、静止期Behcet病患者和正常对照组的外周血，分离外周血单个核细胞（PBMCs），磁珠分离单核细胞和CD4+T细胞。利用荧光定量PCR的方法检测PBMCs中AhR表达水平，利用ELISA方法检测PBMCs培养上清，CD4+T细胞培养上清，DCs和DC/T细胞共培养上清中细胞因子水平；利用流式检测产生IL-17和INF-γ的CD4+T细胞比例。结果：（1）AhR在活动期Behcet病患者PBMCs中mRNA表达水平降低。活动期Behcet病患者PBMCs在anti-CD3/CD28的刺激下分泌IL-17，IFN-γ和IL-22的水平显著高于正常对照组。FICZ和ITE能够显著抑制Behcet病患者和正常对照组PBMCs分泌IL-17，IFN-γ，并可以显著促进其分泌IL-22。（2）活动期Behcet病患者CD4+T细胞分泌IFN-γ,IL-17和IL-22的水平显著高于正常对照组。而且FICZ和ITE可以抑制CD4+T细胞分泌IFN-γ和IL-17，而对IL-22分泌具有促进作用。在FICZ和ITE对CD4+T细胞作用的过程中，FICZ和ITE能够显著上调STAT3和STAT5的磷酸化水平，而对于STAT1和STAT4的磷酸化水平没有统计学的影响。FICZ和ITE不仅可以分别显著抑制Th1和Th17细胞重要的转录因子T-bet和RORC表达，而且对Th17细胞功能和亚型维持的分子IL-23R和CCR6也有显著的抑制作用。（3）FICZ和ITE可以显著抑制活动期Behcet病患者和正常对照组中LPS-处理的DCs表面HLA-DR，CD80和CD86分子的表达水平，对DCs表面CD40和CD83的表达水平没有统计学影响。（4）活动期Behcet病患者LPS处理的DCs分泌IL-1β、IL-6、IL-23和TNF-α水平显著高于正常对照组。FICZ和ITE能够显著抑制活动期Behcet病患者和正常对照组DCs分泌IL-1β、IL-6、IL-23和TNF-α。而对于抗炎因子，FICZ和ITE能够促进活动期Behcet病患者和正常对照组DCs分泌IL-10。（5）FICZ和ITE对DC启动的Th1和Th17细胞极化具有抑制作用。结论：本部分研究显示了AhR的表达降低与Behcet病的活动性相关，AhR活化降低导致了Th1和Th17细胞免疫反应的上调。AhR活化还可以控制DC的分化、成熟和功能。因此，调节AhR激活可能为治疗此类疾病提供了一个新策略。
【作者】王朝奎；
【导师】杨培增；
【作者基本信息】重庆医科大学，眼科学，2014，博士
【关键词】VKH综合征；Behcet病；IL-27；芳香烃受体；

【参考文献】
[1]张海舟.螺旋槽干气密封微尺度气膜非线性振动特性及其试验研究[D].兰州理工大学,化工过程机械,2013,硕士.
[2]李家瑜.延迟容忍网络中基于节点价值的效用路由算法研究[D].湖南大学,软件工程,2012,硕士.
[3]纪学武,彭忻,臧殿光,张延庆,聂刚,徐宝亮,黄川丽.多属性微断裂解释技术[J].石油地球物理勘探,2011,S1:117-120+163+172-173.
[4]马娟.基于情境学习理论的儿童教育游戏设计与实现[D].华东师范大学,教育技术学,2013,硕士.
[5]梁社潮.基于压缩传感理论的电能质量数据压缩的研究[D].哈尔滨工业大学,电气工程,2013,硕士.
[6]迟海音.自恋人格与文学创作[D].山东师范大学,文艺学,2013,硕士.
[7]张红岩.随机森林在医学影像数据分析中的应用[D].湖南师范大学,概率论与数理统计,2013,硕士.
[8]范国清.IXD_b系列铣削头[J].组合机床与自动化加工技术.1993(07)
[9]崔中一.新型AT牵引网运行状态辨别与测控方法研究[D].西南交通大学,电气工程,2014,硕士.
[10]汪亮.基于机器视觉的激光跟踪仪测量靶球自动定位方法研究[D].南京航空航天大学,航空宇航制造工程,2013,硕士.
[11]冯少南.动物福利的立法研究[D].安徽大学,法律,2014,硕士.
[12]杨柳.生态民俗学视角下的农业文化遗产研究[D].温州大学,民俗学,2012,硕士.
[13]周锋.光电码盘全码道检测方法的研究[D].中国科学院研究生院（光电技术研究所）,测试计量技术及仪器,2014,硕士.
[14]楼佳.四川师范大学成都学院考务管理系统的分析与设计[D].电子科技大学,项目管理（专业学位）,2012,硕士.
[15]孔艳丽.电厂原煤仓堵煤机理试验研究[D].浙江大学,热能工程,2013,硕士.
[16]蒋仲仁.制造企业知识资源配置方法与系统研究[D].宁波大学,制造业信息化（专业学位）,2013,硕士.
[17]李红.本科教学质量保障视野下的高校教师教学激励机制研究[D].华东理工大学,公共管理（专业学位）,2014,硕士.
[18]李海屏.溴虫腈及其中间体合成技术研究进展[J].农药研究与应用,2012,04:46-48.
[19]杨慧元.强心剂BDF-9148中间体及抗肿瘤化合物的合成表征[D].山西医科大学,药物化学,2002,硕士.
[20]刘婷.社工介入对义工增能的作用研究[D].华中科技大学,社会工作,2013,硕士.
[21]刘强.电磁干扰效应对超声速半球体逆向喷流影响的研究[D].哈尔滨工业大学,机械电子工程,2013,硕士.
[22]许登荣.IIMS的元数据管理功能实现“数学成都”[D].四川大学,2004.
[23]李莉.《发展汉语》与《成功之路》初级综合教材对比研究[D].内蒙古师范大学,语言学及应用语言学,2013,硕士.
[24]刘丽秋.我国信贷资源配置对产业结构影响的实证研究[D].西南大学,金融学,2013,硕士.
[25]李聪.石墨烯/聚合物纳米复合材料的制备及其结构、性能研究[D].湖北大学,2013.
[26]任萍.具有压电性和热释电性的PVDF纤维的研究[D].天津工业大学,材料学,2004,硕士.
[27]迟唤昭.速度成像、微裂缝检测技术研究及应用[D].吉林大学,固体地球物理学,2013,硕士.
[28]张伟.表面处理蓝宝石基片对ZnO薄膜性能的影响[D].大连理工大学,凝聚态物理,2013,硕士.
[29]刘增辉,黄开基,檀莉,苗振国.抗多径自适应接收机的研究[J].无线电工程.1998(01)
[30]黄坚平.新媒体环境下的高校校园文化建设研究[D].西南政法大学,马克思主义理论,2012,硕士.
[31]罗彩虹.中国民歌英译研究[D].鲁东大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[32]王烨.辣椒游离小孢子培养及其显微观察[D].中国农业科学院,蔬菜学,2004,硕士.
[33]卢鹤立,刘桂芳.中国互联网与区域经济[J].人文地理,2005,05:101-104.
[34]李淼.小麦1Ax1突变基因的载体构建及遗传转化[D].华中科技大学,生物化学与分子生物学,2013,硕士.
[35]陈琳琳.小分子与血清白蛋白相互作用的研究[D].淮北师范大学,分析化学,2012,硕士.
[36]王小雷.河南省动物疫病监测预警机制的建立[D].河南农业大学,预防兽医学,2012,硕士.
[37]张魏友.EPB盾构刀盘结构及其液压驱动系统的研究[D].南京理工大学,机械工程,2013,硕士.
[38]韦增旭.基于LED室内照明可见光通信研究与设计[D].河北科技大学,电路与系统,2014,硕士.
[39]叶彩鸿,董新平.论客户关系管理与知识管理整合的必要性[J].图书情报工作,2005,07:41-44.
[40]曹茂才.地方语文课程的建设[D].福建师范大学,教育,2003,硕士.
[41]蒙启泳.不锈钢厨具复合压力焊自动化生产线的研制与应用[D].华南理工大学,机械工程,2012,硕士.
[42]马丽峰.从功能翻译理论看法律文体可译性[D].西南政法大学,外国语言学及应用语言学,2012,硕士.
[43]高君君.植物根际促生菌的筛选及其对番茄青枯病的生防作用[D].扬州大学,土壤学,2011,硕士.
[44]王乾乾.氧化石墨烯的制备及其对聚氨酯材料的改性研究[D].烟台大学,2012.
[45]黄文宗.热固性预浸料的自动铺带工艺参数分析与优化[D].华中科技大学,机械电子工程,2013,硕士.
[46]周霖.基于混沌的图像加密及其DSP实现[D].广东工业大学,控制理论与控制工程,2014,硕士.
[47]徐嘉丽.石油勘探开发中的数据场可视化技术的研究[D].浙江大学,生物医学工程,2004,硕士.
[48]彭学仕.提高熔体质量防止铸锭裂纹[J].轻合金加工技术.1989(04)
[49]蒋震.MRI菲立磁增强扫描对超急性期放射性肝损伤评价的实验研究[D].苏州大学,影像医学与核医学,2003,硕士.
[50]付世昌,董一鸿,唐燕琳,陈华辉,钱江波.基于事件的位置不确定移动对象连续概率Skyline查询[J].自动化学报,2011,07:836-848.